Merck 蛋白酶K

Merck 蛋白酶K

說明：枯草蛋白酶類高活性蛋白酶，生物實驗室常用酶之一。該酶在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。用于mRNA和DNA與蛋白質的分離。

活力：40mAnsom u/mg

性狀：粉末，是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲/氨/酸蛋白酶，來源于白色念球菌（. Tritirachium album. ），具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶失活，反而增強和穩(wěn)定酶活性，并在較廣的PH范圍內（PH4-12.5）均有活性。在組織或細胞核酸分離時，使核酸酶（RNA和DNA）以及反應中其他酶失活。

用途：生化研究。廣譜蛋白酶，95C加熱10分鐘，則*失活?？商娲鶧EPC處理RNA抽提用的離心管和 頭，實現(xiàn)滅活RNase A的目的，也用于處理RNase-Free的水。充分降解組織或細胞中蛋白質分子特別是核酸，以達到釋放和萃取高質量核酸的輔助試劑。用于質粒或基因組DNA、RNA的分離以及蛋白多肽印跡實驗。

蛋白酶是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到。該酶有兩個ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關系。然而，如果從該酶中除去ca2+，由于出現(xiàn)遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。所以，蛋白酶消化過程中通常加入edta（以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。

蛋白酶，是一種切割活性較廣的絲/氨/酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質的能力，因而它應用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內（pH 4-12.5）均有活性。

推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

蛋白酶配制標準：20mg/ml蛋白酶K配制標準（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

蛋白酶的作用

值得注意的是，蛋白酶在原位雜交技術中通常用于雜交的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果.

孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時；理想孵育時間為2小時。