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涂布平板法的實(shí)驗(yàn)原理與方法
  • 發(fā)布日期:2022-07-13      瀏覽次數(shù):4520
    • 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一種操作方法。由于將含菌材料現(xiàn)加到還較燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡,而且采用稀釋倒平板法也會(huì)使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長(zhǎng),因此在微生物學(xué)研究中更常用的純種分離方法是稀釋涂布平板法。

      實(shí)驗(yàn)原理

      在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。

      實(shí)驗(yàn)器材

      1.活材料:蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑。

      2.培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基

      3.器材:90ml無(wú)菌水、9ml無(wú)菌水、無(wú)菌平皿、lml無(wú)菌移液管、天平、稱(chēng)樣瓶、記號(hào)筆、玻璃刮鏟等。

      (提示:10-1為10的負(fù)一次方,即0.1;10-2為10的負(fù)二次方,即0.01)

      第一步:系列稀釋

      樣品稀釋液的制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取待測(cè)樣品10g,放入裝有90ml無(wú)菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置搖床上振蕩20min,使微生物細(xì)胞分散,靜置20-30s,即成10-1稀釋液;再用1ml無(wú)菌吸管,吸取10-1稀釋液lml,移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中,吹吸3次,讓菌液混合均勻,即成10-2稀釋液;再換一支無(wú)菌吸管吸取10-2稀釋液1ml,移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中,也吹吸三次,即成l0-3稀釋液;以此類(lèi)推,連續(xù)稀釋?zhuān)瞥?0-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。

      用稀釋平板計(jì)數(shù)時(shí),待測(cè)菌稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測(cè)菌的數(shù)量多時(shí),稀釋度應(yīng)高,反之則低。通常測(cè)定細(xì)菌菌劑含菌數(shù)時(shí),采用10-7、10-8、10-9稀釋度,測(cè)定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí),采用10-4、10-5、10-6稀釋度,測(cè)定放線(xiàn)菌數(shù)量時(shí),采用l0-3、10-4、10-5稀釋度,測(cè)定真菌數(shù)量時(shí),采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

      第二步:涂步平板

      平板接種培養(yǎng) 平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

      (1)混合平板培養(yǎng)法 將無(wú)菌平板編上10-7、10-8、10-9號(hào)碼,每一號(hào)碼設(shè)置三個(gè)重復(fù),用無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號(hào)10-9的3個(gè)平板中,同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號(hào)10-8的3個(gè)平板中,再吸取10-7稀釋液各lml放入編號(hào)10-7的3個(gè)平板中(由低濃度向高濃度時(shí),吸管可不必更換)。然后在9個(gè)平板中分別倒入已融化并冷卻至45-50℃的細(xì)菌培養(yǎng)液,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板,使菌液與培養(yǎng)液混合均勻,冷凝后倒置,適溫培養(yǎng)。至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。

      (2)涂抹平板計(jì)數(shù)法 涂抹平板計(jì)數(shù)法與混合法基本相同,所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中,待凝固后編號(hào),然后用無(wú)菌吸管吸取0.1ml菌液對(duì)號(hào)接種在不同稀釋度編號(hào)的瓊脂平板上(每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)重復(fù))。再用無(wú)菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻,每個(gè)稀釋度用一個(gè)滅菌刮鏟,更換稀釋度時(shí)需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時(shí),也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20-30min,使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后將平板倒轉(zhuǎn),保溫培養(yǎng),至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。



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